Cultivo in vitro

Álvaro el medio está diseñado para proveer todos los nutrientes que requiera una planta, carnívora o no. Ahora in vitro la planta no obtiene toda su energía de la fotosíntesis, lo hace también de los 30 g de sacarosa que contiene el medio, y esto no está a discusión, está demostrado que la sacarosa se va consumiendo, conforme la planta crece en el frasco(La sacarosa produce fructuosa y glucosa, está última es degradada por las células hasta co2 y agua y en el proceso obtiene energía para realizar todas sus funciones). Aqui te dejo una imagen de un frasco de D. muscipula, ¡¡germinada de una semilla y tiene ahi cuatro meses!!!,


¿La ves empobrecida y muriendo?

 

todo lo contrario, la veo genial, bien, entonces me he equivocado lo siento mucho.

 

eso es una dionaea?

 

Aunque no lo creas si, pero multiplicada un buen ! ya las vi in vitro, parecen lechuguitas pero sacandolas se ponen bien.

 

El detergente puede ser cualquiera o uno en especial o una marca o para trastes o ropa o que? y muy genial lo de In vitro la dionaea es lo maximo

 

Hola a todos, regreso con la parte de la esterilización de material. El término esterilización se refiere a matar todas las formas de vida de una área dada y los métodos se pueden dividir en físicos y químicos.

Uno de los métodos físicos que vamos a utilizar es la esterilización por calor. Para ello se emplea una autoclave o una olla de presión, en su interior se alcanza una temperatura de 121 °C y si mantenemos está temperatura por 15 minutos, podemos asegurar la esterilización del material.

Hay endosporas de microorganismos que resisten 100 °C por varias horas, por ello hervir un material en agua, no significa que este estéril. Las autoclaves tienen un medidor de la presión y se alcanzan los 121 °C cuando éste marca 15 libras por pulgada cuadrada o 1,05 Kg por cm cuadrado.

Por tanto, podemos esterilizar diversos materiales en la olla de presión, por ejemplo: el medio de cultivo contenido en los frascos, pinzas y bisturi envueltos en una bolsa de polipapel, cajas de petri envueltas en bolsas de polipapel, frascos con agua, etc. La bolsa de polipapel sirve para mantener estéril el material hasta su uso y resiste los 121 °C. En la siguiente foto se muestra una bolsa de polipapel con una caja petri en su interior, una lampara de alcohol y un tubo con alcohol, en el cual están el bisturi y las pinzas de disección, todo en la campana de flujo laminar( cuando no se tenga la campana, el material se coloca en la caja de plástico)


en está otra imagen, su puede observar al lado izquierdo los frascos con medio de cultivo y los frascos con las plantas, las cuales se van a pasar a nuevos frascos.


Para esterilizar el bisturí y las pinzas, cada uno se "flamean" con ayuda de la lampara de alcohol, hasta alcanzar el color "rojo vivo".


y se dejan enfriar en el borde de la caja de petri.


Las pinzas y bisturí se deben manipular, cogiendolos por un extremo y evitando que las puntas toquen algún objeto o superficie que no esté estéril. La manupulación incorrecta de estos instrumentos es la causa más frecuente de contaminación de un cultivo. En la siguiente foto se muestra como tomar una plántula, por cierto es de Drosophyllum lusitanicum, con las pinzas para colocarla en el interior de un frasco.


Las pinzas y bisturí se deben esterilizar con la flama de la lampara de alcohol, frecuentemente, digamos cada que pasemos plántulas a un fracso, esto ayudará a tener un mejor control de hongos y bacterias contaminantes. En la fotografía siguiente tenemos el frasco abierto con las plantas en su interior y las pinzas y bisturí estériles y enfriandose en el borde de la caja petri.


Cuando terminemos de transplantar todas las plantas, a cada frasco se adhiere una película plástica alrededor de la tapa, esto ayuda a que nuestros cultivos no se contaminen, por esporas del exterior.


Por último, el transplante terminado.


En la siguiente sesión hablare del medio de cultivo, sus componentes, función e importancia y modo de prepararlo. Si tienen algúna sugerencia u observación para mejorar la presentación, estoy a sus ordenes.

 

Cualquier detergente líquido que encuentres en la tienda, sirve para abatir la tensión superficial del agua y permitir con ello que toda la cubierta de las semillas esté en contacto con la solución desinfectante.

 

Que plantitas de drosophyllum tan padres !! ya quiero unas jajaja :S. Saludos

 

Muchas gracias por tus aportes Acourtia!!

Saludos

 

Mensaje borrado.......

 

Despué de tener abandonado el tema, lo retomo para abordar la forma de preparar el medio de cultivo Murashige-Skoog, el medio contiene sustancias que las plantas necesitan en mayor cantidad que otras, por ello se llaman macronutrientes, aquellas que requieren en cantiades pequeñas son los micronutrientes, sustancias orgánicas como vitaminas, mioinositol y sacaroza y un agente gelificante.

Los macronutrientes son:
Nitrato de potasio 1900 mg/L
Nitrato de amonio 1650 mg/L
Sulfato de magnesio 370 mg/L
Fosfato monobásico de potasio 170 mg/L

Los macronutrientes contienen nitrógeno, fósforo y potasio, el nitrógeno es esencial para el crecimiento de las plantas, el fósforo es necesario para almacenar energía en forma de ATP y el potasio para un buen desarrollo de las raíces.

Los micronutrientes son:
ácido borico 6.2 mg/L
Sulfato de Zinc 8.6 mg/L
Sulfato de cobre 0.025 mg/L
Sulfato de cobalto 0.025 mg/L
Molibdato de sodio 0.25 mg/L
Sulfato de manganeso 22.30 mg/L
Ioduro de potasio 0.83 mg/L
Cloruro de calcio 440 mg/L
Sulfato ferroso 27.8 mg/L
ácido etilendiaminotertaacético 37.3 mg/L

Los micronutrientes contienen metales necesarios para que se realizen las reacciones del metabolismo celular.

Los aditivos organicos son:
ácido nicotinico 0.5 mg/L
Piridoxina 0.5 mg/L
Tiamina 0.1 mg/L
mio-inositol 100 mg/L

Para la preparación se pesan todos los ingredientes y se disuelven en agua destilada, se adicionan 30 g/L de sacaroza(azúcar) y se agita hasta su completa disolución, ahora ajustar el pH a 5.8 con ácido o alcáli y entonces adicionar el agente gelificante(agar bacteriológico) a una concentración de 7 a 8 g/L, entonces calentar hasta la completa disolución del agar, vaciar a los frascos y esterilizar en olla de presión o en autoclave a 121ºC por 15 minutos.

Como puedes ver el medio contiene sacrosa como fuente de energía, las celulas de las plantas que crescan en el medio la utilizarán para formar ATP y con el fabricar sus proteínas a partir del nitrógeno contenido en los macronutrientes.

Ahora estás en condiciones de hacer tus siembras in vitro. Para plantas carnívoras el medio MS debe de utilizarse a 1/3 de su concentración, para orquídeas, cactaceas, azucenas etc, tal cual.

Ahra voy a mostrarles parte del trabajo realizado siguiendo el procedimiento descritó.
Semilla germinando de D. lusitanicum


Frasco con semillas de Drosera sin germinar.


Frasco con semillas de D. capensis, que me dio Tuuagso


Dionaea muscipula


Drosera paradoxa


Drosera broomensis


Biblys flreciendo


Drosera ramellosa


Un Hippeastrum


Semillas de Hippeastrum germinando


Frasco con cactus, E. micromeris


Frasco con orquídeas.


Frasco con P. Bifurcatum, cuerno de alce


Como ven hay una gran variedad de plantas que crecen sobre este medio. Hago una invitación a todos los interesados en el cultivo in vitro para enriquecerlo, con sus experiencias y preguntas y a los que asistieron al curso de cultivo in vitro para que comenten como van sus frascos.

 

Increible la byblis...y todas en general!

Para mi ya tienes el titulo de maestro en vitro,,,

Muchas gracias

 

Jajajaja, ya lo tiene, es todo un profesional haciendo in vitro, como si haciera un sandwich ! hasta mas fácil jeje. Que plantas !! lastima que no nos salió a los aprendices. Pero muchas gracias por enseñarnos.

 

Gracias Jafedi por tus comentarios, saludos.

 

Les comento que las semillas Drosera binata dichotoma ya germinaron, desde su siembra hasta la germinación pasaron 12 días, las de Drosera indica, una planta con usos medicinales, 17 días.