Cultivo in vitro de orquídeas. Preparación del medio y siembra

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Estoy tratando de enviar fotos y este es un ensayo
http://subirimagen.infojardin.com/sube/index.php
si esta subio es de los frascos ya esterilizados.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

No es difícil subir fotos, más difícil es todo el trabajo que has hecho con los frascos...

Estoy buscando botellas de refrescos con boca estrecha y cierre hermético para mis próximos experimentos. Así será más fácil evitar contaminaciones en los frascos al sembrar, que creo ya empiezan a producirse

Saludos.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

¿Alguien ha probado las pistolas de calor para la esterilización de los frascos y el medio?
Utilizan aire caliente y aumentan la temperatura entre 200 y 500 ºC según algunas especificaciones.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Llevo 5 dias leyendo todo el foro, voy en la pagina 65 y agradezco todas las experiencias que han colocado, creo que me serán de mucha utilidad.
Algunas fotos de mi primer intento con medios.
Equipo utilizado




Productos utilizados


Frascos con medios Tomate, Tomate-banano y piña


Y despues de leer el foro una buena embarrada, esterilizé por 40 minutos, me pasé un tris
Gracias a todos, especialmente Olivia.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Superman: No sé, no creo que puedan usarse esos calentadores, pero es que hay que recalentar todo el frasco, la mezcla y la tapa. Temperatura y tiempo.

Alvaro, eres un monstruo, creo que vas a tener suerte. Lo tienes todo bien pensado así que con un poco de práctica éxito seguro.
Muchos frascos así que te recomiendo esperar pacientemente leyendo hasta la página 100 unas dos semanas antes de sembrar.

15 días de la primera siembra, 8 de la segunda: Algún hongo creo ver en el que sembré tras el agua con azúcar, el que ya decía antes que creía haberlo hecho mal.

Saludos.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Son pistolas de calor usadas en electronica; es que usar la cocina, el horno, el microondas o una cámara de flujo, cuando en realidad la pistola puede hacer eso en un espacio limitado sin mover mucho los frascos. Me dio curiosidad.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Compañeros una pregunta,

Yo quiero hacerme una glovebox pero lo más seguro sería de vidrio o plexiglás,
ahora bien estaba leyendo que otra opción a utilizar, son las lamparas UV o fluorescentes germicidas, el precio es relativamente cómodo, sin embargo lo que no estoy seguro es en la secuencia a la hora de insertar el equipo en la cámara.

La pregunta en sí es.

Si introduzco los frascos ya con medios de cultivo y previamente autoclavados, al igual que las semillas previamente esterelizadas, existe alguna contraindicacción, a la hora de encender la luz ultravioleta por alrededor de 2 horas, que afecte los componentes del medio de cultivo, y/o afecten la viabilidad de las semillas?...

Si no es así, entonces podría introducir con todo lo que voy a trabajar, y encender las lamparas 2 horas previo a la siembra.

Aplicaría lo mismo a la hora de transplantes de protocormos y/o plántulas...

Gracias.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Safito: tengo entendido que la luz ultravioleta afecta las semillas esterilizandolas, y que no hay problema con el medio.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

X2
La luz UV es germicida, por lo que daña todo tegido vivo. Se utiliza para desinfectar el area antes de trabajar, se usa en lugar de utilizar el cloro (legia) y el alcohol en la camara.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Entonces si utilizo el método de la jeringa, la jeringa sería resistente/repelente
de los rayos ultravioleta.?

Todo esto lo pregunto, porque me gustaría saber, si yo puedo introducir todos los materiales, encender la cámara 2 horas, y saber que de ahí en adelante no debo de introducir nada, y todo lo que esté adentro es ésteril.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola amigos,

Estoy leyendo vuestro debate sobre la luz UV, no puedo deciros que tal funciona, ya que no la he probado, sólo que hasta ahora he ido reduciendo las cantidades de lejía hasta casi nada y los niveles de contaminación dentro de la caja son casi nulos. Así que no creo que realmente sea necesaria la luz UV.

Un saludo,

Olivia

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola monstera, pues contarte que he leído por móntones tu thread y es en parte lo que me ha animado a seguir adelante con este proyecto, es una lástima que no se me ocurrió hace dos años cuando empezastes, ya que mis prioridades eran otras.

Sin embargo, en este momento si quiero seguir con el proyecto de propagación de orquídeas, sin embargo también me quiero aventurar más y proceder hacer la micropropagación por meristemos.

Extensas lecturas he hecho, y comparación de diferentes medios de cultivos para diferentes especies y diferentes propósitos.

El discurso de la Luz Ultra Violeta nace, porque en la página del Ogro hace referencia a utilizar una camara laminar casera, y se puede desinfectar únicamente con la luz, el método que utilizas es mucho más barato, sin embargo me parece un poquito engorroso en el sentido de que hay que rociar lejía por toda la cámara, a parte que el nivel de transparencia de la tuperware a mi no me gusta, y otra cuestión es que me gustaría utilizarla casi de uso diario, o al menos durante los fines de semana.

Otra cuestión es que como quiero aventurarme a la micropropagación por meristemos, necesito más precisión.

Mi idea es construir una cámara como la siguiente:


http://www.artisan-scientific.com/itemimages/Terra_Series_100_168900B_Glove_Box_View1.JPG

Con excepción de los dos gabinetes (disecantes).

En la parte de arriba colocaré la luz ultravioleta, la ventaja de esto, es que puedo introducir el bisturí, forceps, y demás componentes a utilizar, y encender las lámparas, con esto me puedo asegurar de que todo está totalmente esterilizado, por lo cual, en teoría, no me debería de preocupar por ninguna corriente de aire a la hora de trabajar hermeticamente.

Sin embargo, ya que no puedo introducir las semillas y encender las lámparas ya que al parecer estas afectan al ADN de las semillas (pueden mutar, [a lo mejor y la mutación son excesivas flores, o flores de 1 metro de diametro]) entonces, supongo yo, que al abrir temporalmente la escotilla e introducir las semillas, estoy introduciendo eventualmente una corriente con esporas, y a su vez, un contenedor (o jeringa) contaminada.

Lo único que se me ocurre, es tener previamente un spray con lejía (cloro), y pulverizar inmediatamente una vez que se cierra la escotilla.

A menos de que exista alguna manera, de introducir las semillas en una placa petri, o un tubo de ensayo, que tenga protector solar, o tal vez alguien se le ocurra una idea, de poner una especie de papel aluminio encima de las semillas, y estas estén protegidas, y la radiación limpie hasta el último rincón.

Hasta el momento, esa es la última pieza del primer rompecabezas.

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola safito,


Hay tienes la respuesta, si al abrir para meter las semillas tienes que pulverizar con lejía, ya no necesitas la lámpara.

Pulverizas mínimamente dejas reposar 20 minutos y listo para usar. Los utensilios los flameo antes de entrarlos y listo.

La caja "tupper" le pones un vidrio en la parte superior en vez de su tapa y ya tienes total visibilidad.

Tu caja se ve muy profesional, pero no necesariamente te dará mejor resultados. Conozco que gente que usa cámara de flujo con mayor nivel de contaminación que en globebox.

Los meristemas de verdad, sólo tienen dos complicaciones, aislar y esterilizar el meristema. Lo demás és incluso más sencillo que las semillas.

Un saludo

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

te quiero comentar que la lampara es muy riesgoso utilisarla porque demasiada exposicion a esa luz produce cancer es tu decision pero ten cuidado es muy buena pero tiene sus riesgos es mas facil ser meticuloso en extremo o en exageracion y da buenos resultados.
Monstera tambien te quiero comentar que el cultivo de meristemos es un poco mas complicado de lo que piensas por que no utiliza los medios que usas se usa MS o KC normalmente y tiene tantas variaciones que se convierte en un embrollo ademas se usan los reguladores de crecimiento que es lo que determina que es lo que deseas de tu meristemo y por ultimo para llegar al meristemo es un problema porque mide como medio milimetro y tiene que hacerse en la camara de flujo laminar con microscopio o una lupa gigante no creo que se aprecie bien en la glove box para hacer los cortes que se hacen para llegar al meristemo sin dañarlo.
Pero tiene la ventaja que una ves que se supera todo esto que aparentemente es muy dificil se tiene la cantidad de planta que se necesite y son clones de las plantas madre no sucede como en las semillas que tienes variaciones geneticas.
Espero no te molesten mis comentarios que yo aprendi mucho leyendote y de ahi nace mi inquietud por la micropropagacion de las orquideas y lo poquito que he aprendido es por la inquietud que despertaste bueno me despido cuidate mucho.
Ruben

 

Re: In vitro I y II. Preparacion del medio y siembra

Hola Ruben,

Cómo me voy a molestar, si tienes toda la razón, pero como en todo, se puede hacer un básico, algo más sencillo, aunque sea menos profesional, vamos que cuando no tienes un laboratorio, hay que buscarse la vida como se puede.

Los medios los venden ya preparados y también las auxinas, citoquininas y giberilinas sueltas.
El meristema puede crecer aunque haya un poco más de tejido. Cierto que no es tan preciso como si lo aislas bien y que muchos se pierden en la desinfección, pero se puede hacer.

Vale que hay quien dirá que eso no es cultivo de meristemas, pero...

De todas maneras, para los que quieran animarse, que nadie olvide que todo esto tiene un coste de tiempo y espacio importante.

Ruben un placer volver a hablar contigo.

Un saludo